湖南中医药大学

王若光 教授，博士生导师（医学博士，生物学博士后）

 

摘要：目的：探讨黄芪丹参复方成分对一氧化氮合成阻滞动物胎盘病理形态的影响作用，从形态学方面研究益气化瘀法提高胎盘血供的内在机制。方法：石腊切片，伊红、苏木素染色，光镜分析，计算滋养细胞面积比率。结果：经黄芪丹参复方成分干预后，治疗组游离绒毛结构清晰，中轴内毛细血管未见充血，管壁较完整，绒毛面积及绒毛间隙面积与模型组相比，差异显著(P<0.01)，间隙面积比空白组略小，但无统计学意义；底蜕膜层结构清晰，血管数目较多。结论：黄芪丹参复方组分具有修复子宫-胎盘超微结构，防止绒毛萎缩，从而达到改善胎盘循环，提高血液灌注的作用。

主题词：一氧化氮合酶抑制剂；动物模型；大鼠；妊娠并发症；心血管；高血压；滋养层；胎盘；病理学改变

Li Chun-mei, Wang Ruog-uang, You Zhao-ling, Liu Xiao-li, Liu Hui-ping Li jie, He Fu-yuan

Hunan College of TCM, ICWM Teaching Clinical Department,Hunan (410007)

Abstracts: Objective: To explore the components of milkvetch-red sage compound recipe (MRS) on placenta morphologic change of NO synthesis blocking midel,to study the intrinsic mechanism of Yiqi Huayu phinciple (YQHYF) elevate intraplacenta blood supply. Methods: Paraffin section HE stain, light microscopy calculate the area of trophocyte area rate. Results: After intervention of MRS, the treated group;the structure of free villi was clear, intra-axial capillary was not congistid, vascular wall was intact, villi area and intervillous space area compared with control group, the difference was significant(p<0.01).interspace area was smaller than blank group, but without significance. the structure of basal decidual cell was clear, the number of blood vessel were numerous. Conclusion: MRS component can repair ultrastruture of uterus-placenta, prevent, prevent the atrophy of villi, so as to improve the placenta blood circulation, elevate the blood flow perfusion.

Key words: L-NAME, Animal model, Rat, Pregnancy complications，cardiovascular; Hypertension, IUGR, placenta, trophodermal villus, morphological pathology

 

胎盘局部病理改变是导致胎盘-胎儿血供下降的根本原因，血管内皮细胞毒性因子以及NO等活性物质多来自胎盘。对维持妊娠状态下胎盘循环的高流速、低阻力状态具有重要作用。前期我们进行一些相关研究^[1~4]，目前有关一氧化氮合成阻滞鼠胎盘形态学研究的报告尚无。本研究对此进行了探讨，结果报告于下。

SD系大鼠75只，雌雄2:1分笼饲养，鼠龄100-120天，体重200-250g，由上海实验动物中心提供。雌鼠按妊娠顺序随机分为模型组、空白组、酒精组、对照组、治疗组，每组10只进行实验。

以益气化瘀立法黄芪丹参复方组分（黄芪提取黄芪皂甙、黄酮类；丹参提取丹参酮、丹参酸），由湖南中医学院药学院制成注射液，每毫升生药含量为1g，灭菌冷藏备用。

考马斯亮蓝测定盒，批号20011026，由南京建成生物工程研究所提供。一氧化氮(NO)测定盒，批号20010914，由南京建成生物工程研究所提供。L-精氨酸甲酯，CAS Registry：51298-62-5,Purity≥99%；USA Cayman Chemical公司产品。硝酸甘油，批号20010924。80-2型离心机，上海云楼医用仪器厂。HZS-H超级恒温水浴振荡器，哈尔滨市东联电子技术开发有限公司。20GB大鼠血压测量仪，中日友好医院生产。BTS-20-M彩色图像显微分析系统，江南双目200型显微镜，江南光学仪器厂。

动物造模：雌鼠阴道涂片，将动情期雌鼠与雄鼠按2:1合笼过夜，次晨取阴道生理盐水冲洗液镜检发现精子者为妊娠第1天，妊娠期每天称体重1次。于妊娠第10天开始皮下注射L-NAME，每日125mg/kg体重，空白组10只，于妊娠第10天开始皮下注射双蒸水，量同模型组，分别至妊娠第18天。每组于第8天及第18天测血压。分为空白组、模型组、硝酸甘油组、黄芪丹参复方成分组。每组于妊第８天、18天测量血压；妊娠第17天将孕鼠放入标准代谢笼内，收集24小时尿液测定24小时尿蛋白；妊娠18天剖腹取胎，观察子宫胎盘形态，记录胎仔体重等各项指标。随机取子宫-胎盘复合体放入10%福尔马林固定，各级酒精脱水，石蜡包埋切片,切片厚约5μm，常规苏木素、伊红染色，显微镜检并行电脑摄相，观察子宫胎盘形态学变化。数据用SPSS10.0统计软件经计算机处理。

二、结果

1．黄芪丹参复方组分对妊娠高血压的治疗作用(g, ±s)见表1、2

表1 各组动物胎仔发育情况比较

各组胎仔重、胎盘重、肝重、脑重量经方差分析，结果表明：模型组体重明显低于空白组及酒精组(P<0.01)，治疗组和阳性组均可不同程度地改善胎仔重、肝重(P<0.01,P<0.05)，且治疗组优于阳性组。

表2 各组孕鼠胚胎枯萎、死亡情况比较(例)

上表结果表明：模型组胚胎枯萎及胎仔死亡发生率明显高于空白组(P<0.01)，经黄芪丹参复方组分治疗后，其胚胎枯萎及胎仔死亡发生率明显下降(P<0.01)，而硝酸甘油组则无此作用(P>0.05)。

2．黄芪丹参复方组分对尿蛋白、血压影响

表3结果显示：模型组尿蛋白、血压水平明显升高，经黄芪丹参复方组分治疗后，尿蛋白、血压均降低(P<0.01)，阳性组血压降低(P<0.01)，使尿蛋白略有下降，但差异无统计学意义。提示：黄芪丹参复方组分具有降低尿蛋白的作用，与阳性组相比，疗效更佳。

表3 各组孕鼠尿蛋白、血压水平比较( ±s)

组别	N	尿蛋白（g/L）	基础血压(mmHg)	处死前血压(mmHg)
空白组	9	0.605±0.301	83.61±18.20	86.56±24.26
酒精组	10	0.917±0.486##	83.81±12.35	99.52±19.30##
模型组	8	1.512±0.403**	83.63±14.40	151.15±35.76□**
阳性组	8	1.155±0.737	85.49±15.84	109.65±30.21□#
治疗组	10	0.883±0.499#	85.28±15.52	106.53±16.49□##

注：模型组与空白组比较^**P<0.01，与模型组比较^#P<0.05，^##P<0.01,与基础血压比较^□P<0.05

3.黄芪丹参复方组分对子宫胎盘超微结构的影响（见表4）

剖腹后发现模型组孕鼠子宫、胎盘明显呈瘀血、水肿状，余组无明显改变。光镜下，可见大鼠胎盘组织分为三层：底蜕膜层、绒毛层、羊膜层。各组情况如下：

表4 胎盘绒毛超微结构比较表

空白组、酒精组：游离绒毛结构清晰，绒毛内血管正常，未见充血，绒毛间隙适中；底蜕膜结构清晰，血管内皮细胞完整，血窦丰富(见图1)。

阳性组：游离绒毛结构部分清晰，部分呈纤维素样改变，中轴内毛细血管清晰，间隙面积较模型组宽，但差异无统计学意义；部分底蜕膜呈片状坏死或者呈索状，少数血管管壁增厚(见图2)。

模型组：游离绒毛结构大部分模糊、部分绒毛纤维素样变或呈现萎缩现象，合体细胞结节增多,绒毛中轴内毛细血管充血，结构模糊,绒毛间隙增宽,与空白组相比,差异显著(P<0.01),中间充满母血，充血血液中可见大量中性粒细胞,红细胞聚集成团，呈瘀血状态,部分切片中可见少量中幼红细胞;底蜕膜变薄，部分底蜕膜出现纤维化变，血管充血，管壁部分增厚并可见大量中性粒细胞及淋巴细胞附着于管壁部、部分血管壁缺损，管壁周围可见红染(见图3)。

治疗组：游离绒毛结构清晰，中轴内毛细血管未见充血，管壁较完整，绒毛面积及绒毛间隙面积与模型组相比，差异显著(P<0.01)，间隙面积比空白组略小，但无统计学意义；底蜕膜层结构清晰，血管数目较多(见图4)。

结果表明：黄芪丹参复方组分具有修复子宫-胎盘超微结构，防止绒毛萎缩，改善缺血缺氧的作用。

三、讨论

大鼠胎盘形态为盘状胎盘（discoid placenta），呈圆形或椭圆形。属迷路型胎盘，子宫内膜与绒毛膜组织交错程度最高的应属迷路型胎盘（labyrinthine type of placenta）。胎盘绒毛膜的滋养层细胞形成迷路样孔状网状结构，浸润在母体血液当中。迷路型胎盘组织与母体血液交换面积最大，母体与胎儿的物质交换效率最高。胎盘屏障方面，大鼠则母体侧最后一道屏障即血管内皮细胞被胎盘滋养细胞侵蚀后，胎盘的绒毛小叶就直接浸润在母体血液当中，母体血和胎儿血之间的组织屏障则完全由胎儿侧三层组织组成。分为绒毛的滋养层细胞、结缔组织及血管内皮细胞。此类被称为血液绒毛膜型胎盘^[5]。此与灵长类及人类相同，即鼠型为：血液/三层滋养层细胞：合体滋养细胞上下方都有一层细胞滋养层。迷路型胎盘胎儿侧微循环血管之间相互连接形成网状，母体血液充润其中。血液对流式，物质交换最高，血管虽然平行，但血流方向相反。胎儿胎盘比例大，可达20：1。

 

[1]尤昭玲，王若光.妊娠高血压综合征中医药研究思路.中国中西医结合杂志2002,7:37

[2]刘正刚，王若光，尤昭玲，等.一氧化氮合成阻滞模型大鼠血浆一氧化氮变化及益气化瘀法干预作用.实用预防医学杂志2002,9:36

[3]刘正刚，王若光，尤昭玲，等.一氧化氮合成阻滞模型大鼠血浆肿瘤坏死因子α变化及益气化瘀法干预作用.实用预防医学杂志2002,10:47

[4]王若光，尤昭玲，李克湘，等.益气化瘀法对胎萎不长大鼠胎盘形态学影响研究.中国中医药科技1997;4(1):41